Empat metode utama analisis mikroba meliputi pengukuran pertumbuhan, penghitungan mikroba, indeks fisiologis, dan mikroskop smear.
Pengukuran pertumbuhan
Pengukuran volume: Status pertumbuhan mikroorganisme tercermin dengan mengukur jumlah hifa dalam volume media kultur tertentu. Cara ini sederhana dan cepat, tetapi kesalahannya besar.
Metode berat kering: Berat kering mikroorganisme ditentukan dengan sentrifugasi atau filtrasi. Metode ini lebih rumit dan biasanya digunakan bila produk mikroba adalah sel bakteri, seperti ragi kering, pakan, dll.
Turbidimetri: Nilai serapan pada panjang gelombang tertentu diukur dengan spektrofotometer ultraviolet untuk mengetahui status pertumbuhan mikroorganisme. Metode ini terutama digunakan untuk pemantauan pertumbuhan bakteri di industri fermentasi.
Pengukuran panjang miselium: Untuk jamur berfilamen dan beberapa actinomycetes, panjang pertumbuhan hifa dalam jangka waktu tertentu dapat diukur pada media kultur.
Metode penghitungan mikroba
Metode hemositometer: sederhana, intuitif, dan cepat, tetapi hanya cocok untuk menghitung spora yang dihasilkan oleh mikroorganisme bersel tunggal atau mikroorganisme berfilamen, dan hasilnya mencakup bakteri mati dan hidup23.
Metode penghitungan pewarnaan: Gunakan pewarna seperti merah netral, biru tripan, dan biru metil untuk membedakan sel mati dari sel hidup.
Metode pengenceran cair: Lakukan pengenceran serial sepuluh kali lipat dari sampel bakteri yang tidak diketahui, catat jumlah tabung reaksi yang tumbuh pada setiap pengenceran setelah kultur, lalu hitung kandungan bakteri hidup berdasarkan kelipatan pengenceran sampel. Metode ini lebih rumit, tetapi jumlah bakteri hidup dapat dihitung.
Metode penghitungan koloni pelat: Sebarkan larutan bakteri encer pada media kultur padat, dan hitung jumlah bakteri dalam larutan bakteri asli setelah kultur. Metode ini dapat memperoleh informasi tentang bakteri hidup, tetapi pengoperasiannya rumit dan memerlukan waktu kultur tertentu.
Metode indikator fisiologis
Penentuan kandungan nitrogen: Kandungan nitrogen pada sebagian besar bakteri adalah 12,5% dari berat kering. Status pertumbuhan mikroorganisme secara tidak langsung dapat dicerminkan dengan mengukur kandungan nitrogen.
Penentuan kandungan karbon: Gunakan larutan K2Cr2O7 untuk mengukur serapan pada panjang gelombang tertentu, gambar kurva standar untuk menghitung jumlah pertumbuhan.
Metode penentuan gula reduksi: Mencerminkan status pertumbuhan mikroorganisme dengan mengukur jumlah gula pereduksi, yang sering digunakan dalam produksi fermentasi industri skala besar.
Penentuan zat fisiologis lainnya: Termasuk asam nukleat, ATP dan kandungan lainnya, serta produksi asam, produksi gas, konsumsi oksigen, produksi panas, dan indikator lainnya.
Mikroskop apusan
Mikroskop smear merupakan metode pemeriksaan bakteri, sitologi, bakteri enzim, mikrofilaria dan kristal kolesterol. Dengan menyiapkan apusan dan mengamatinya di bawah mikroskop, morfologi dan struktur mikroorganisme dapat dipahami secara intuitif
